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小鼠肝細胞原代培養

產品介紹

小鼠肝細胞原代培養

功能
1肝臟是能量代謝、外源性化學物質生物轉化和血漿蛋白合成重要的器官。
2體外培養的
小鼠肝細胞原代培養可進行細胞移植、基因治療

特性
1組織來源于正常小鼠肝臟組織
2鑒定:albumin, Cytokeratin-18 and Vimentin免疫熒光染色。
3推薦使用小鼠肝細胞專用培養基(本公司可訂購)
4經檢測不含HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌
5該細胞只用于科研

運輸
新鮮活細胞運輸或凍存細胞干冰運輸

保存及應用
如是新鮮原代細胞,請于收到后放入CO2培養箱內靜置2-3h后再進行實驗操作;如是凍存細胞,收到后可放入液氮或-80℃冰箱保存也可進行復蘇操作。

操作步驟:
培養基的配置:基礎培養基500ml+胎牛血清50ml+雙抗5ml 凍存液的配置:DMSO18ml+胎牛血清2ml。 依次比例酌量配置。 超凈工作臺常規配置  移液器1套(2.5μl、20μl、200μl、1ml),酒精燈1盞,液器1臺,斜架1臺,酒精噴壺1個,酒精棉球缸1個,污缸1個, 常規耗材:培養瓶(50㎝2),定量移液管(5ml、10ml),槍頭(1ml、200μl、10μl),培養皿,6/24/48/96孔板,醫用脫脂棉球,保種管  所需試劑:gibco高糖培養基,胎牛血清,雙抗,DMSO,胰酶,苯扎溴氨,75%酒精……  實驗前準備:  所需的各項高壓后的耗材放于超凈工作臺內,用酒精噴壺噴灑實驗臺面,小鼠肝細胞并關閉工作臺打開紫外燈照射30min后開始實驗操作。  次傳代前細胞的復蘇,先用一大燒杯盛滿37℃的溫水放于液氮罐旁邊,待細胞株取出后留上端1/3于37℃水面上盡大速搖動管使其在2min內迅速融化。若種管頂部含有凍存的細胞液在搖動期間用力甩動使其降于管底后再搖動。這一過程可在超凈工作臺外操作。
細胞培養應注意的問題:       
細胞培養過程中,從實驗室的設計到實驗過程中的操作,都需要嚴格控制無菌。由于細胞對于生長的條件比較苛刻,所以小鼠肝細胞無論從實驗室的設計,還是使用的物品及細胞培養的操作過程,都要注意保持無菌環境。
冷凍保存細胞之方法:
冷凍保存方法一:冷凍管置于4°C30~60分鐘→(-20°C30分鐘*)→-80°C16~18小時(或隔夜)→液氮槽vaporphase長期儲存。  冷凍保存方法二:冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3°C至–80°C以下,再放入液氮槽vaporphase長期儲存。*-20°C不可超過1小時,以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80°C冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
細胞欲冷凍保存時,細胞冷凍管內應有多少細胞濃度:
冷凍管內細胞數目一般為1x106cells/mlvial,融合瘤細胞則以5x106cells/mlvial為宜。
應如何避免細胞污染:
細胞污染的種類可分成細菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉漿菌。主要的污染原因為無菌操作技術不當、操作室環境不佳、污染之血清和污染之細胞等。嚴格之無菌操作技術、清潔的環境、與品質良好之細胞來源和培養基配制是減低污染之好方法。

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